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DNA寡核苷酸退火缓冲液简称为DNA退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，自身易形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。

5×寡核苷酸退火缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆，该试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和5×寡核苷酸退火缓冲液按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。

• 避免反复冻融，以免效率下降。
  
• 该试剂只适合于DNA oligo的退火，不适用于RNA oligo的退火。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM，同时溶解5×寡核苷酸退火缓冲液，混匀备用。
  
• 按如下退火反应体系操作：
  

  成分	用量
  Nuclease-Free Water	40μL
  5×寡核苷酸退火缓冲液	20μL
  DNA oligo A(50μM)	20μL
  DNA oligo B(50μM)	20μL

  • 按照上述顺序，依次加入并混匀，如果所用PCR仪没有加热盖，可加入Mineral Oil防止液体挥发。
• 按如下PCR仪的退火条件：
  

  步骤	温度	时间	作用
  1	95℃	2min	Oligo充分变性
  2	每90s下降1℃，降至25℃	约90min	程序退火
  3	4℃	长期保存	暂时存放

• 退火后可直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。